Вирусология

 

Категории диагностических методов

А. Прямое исследование образца (ткань, жидкие среды организма)

Методы прямого исследования также называют методами быстрой диагностики, поскольку они обычно дают результат в тот же день или на следующий день. Это особенно полезно в тех случаях, когда клиническое лечение пациента во многом зависит от быстроты доступности лабораторных результатов, например, диагностика RSV-инфекции у новорожденных, или тяжелые CMV инфекции у иммуноослабленных пациентов.

Вместе с тем важно понимать, что не все методоы прямого исследования дают быстрый результат и, альтернативно, изоляции вируса посредством посева и серологические методы могут дать более быстрый результат. С появлением эффективных антивирусных препаратов, быстрые диагностические методы, как ожидается, будут играть все более важную роль в диагностике вирусных инфекций.

Определение антигена

Примеры определения антигена включают иммунофлюоресцентное тестирование аспирата из носоглотки на респираторные вирусы, например, RSV, гриппа А, В и аденовирусы, обнаружение антигена ротавируса в фекалиях, PP65 CMV антигенемии, тест обнаружения HSV и VZV в соскобе кожи, и обнаружения HBsAg в сыворотке. Главное преимущество этих тестов заключается в том, что они являются быстрыми в выполнении и результат доступен в течение нескольких часов. Тем не менее, этот метод часто весьма трудоемкий, результат трудно читать и интерпретировать, и чувствительность и специфичность низкая. Качество исследуемого образца имеет чрезвычайно важное значение для того, чтобы тест выполнить должным образом.

Электронная микроскопия

Частицы вируса обнаруживаются и определяются на основе морфологии. Обычно используется увеличение примерно в 50 000. ЭM в настоящее время в основном используется для диагностики вирусных гастроэнтеритов путем обнаружения вирусов в фекалиях например, ротавирус, adenovirus, astrovirus, calicivirus and Norwalk-like viruses. Иногда она может использоваться для обнаружения вирусов в мелких пузырьках и других кожных поражениях таких, как herpesviruses и вирус бородавки человека - papillomaviruses. Чувствительность и специфичность ЭM может быть увеличена иммунной электронной микроскопией, в соответствии с которой вирусное специфическое антитело используется для агглютинации вирусных частиц вместе и тем самым сделать их легче узнаваемыми. Главная проблема ЭM в дороговизне, низкой чувствительности. Использование её уменьшается.

Световая микроскопия

Репликации вируса часто производят цитологические изменения в инфицированных клетках. Эти изменения могут быть характерными или неспецифичными. Вирусные включения тельца - это в основном коллекция частиц репликации вируса, либо в ядре или цитоплазме. Примерами вирусного включения тельца могут быть цитоплазматические включения при цитомегаловирусной инфекции и бешенстве.

Определение генома вируса

Метод основан на выявлении вирусного генома, также известен как молекулярный метод. Часто отмечается, что молекулярные методы – это будущее направление вирусный диагностики. Классические молекулярные методы, такие как dot-blot и Southern-blot зависят от использования специфических ДНК/РНК образцов для гибридизации.

Специфика реакции зависит от условий, применяемых для гибридизации. Эти методы могут разрешить для количественного определения ДНК/РНК образца. Тем не менее, зачастую чувствительность этих методов не лучше, чем обычных вирусных методов диагностики.

Более новые молекулярные методы, например полимеразно-цепна реакция (ПЦР), ligase цепная реакция (LCR), усиление на основе нукленовой кислоты (NASBA), и разветвленной ДНК (bDNA) зависят от некоторых форм усиления - либо целевой нуклеиновой кислоты, либо сигнала. bDNA является по существу обычной техникой гибридизации и повышает чувствительность. Вместе с тем, она не так чувствительна, как ПЦР и другие методы усиления. ПЦР - это наиболее применяемая техника усиления. ПЦР является чрезвычайно чувствительным методом: возможно добиться чувствительности до 1 молекулы ДНК в клинических образцах.

Тем не менее, PCR имеет много проблем, главной из которых является загрязнение, поскольку только минутное загрязнение необходимо для ложно-положительного результата. Кроме того, поскольку ПЦР является настолько чувствительным по сравнению с другими технологиями, позитивный результат ПЦР зачастую очень трудно интерпретировать так как это не обязательно показывает на наличие заболевания

Б. Непрямые исследования

  • изоляция вируса – посев исследуемого материала (использование клеточной среды, яиц, животных). Идентификация роста вируса;
     
  • болезни животных или подтверждение смерти нейтрализацией. Подтверждение идентичности вируса может быть выполнено, используя гемадсорбцию-ингибицию, иммунофлюоресценцию и моллекулярные тесты. В настоящее время определение антигена и молекулярные технологии занимают лидирующие позиции в идентификации и диагностике вирусной инфекции, поэтому изоляция вируса путем посева применяется все реже.

В. Серология

Определение антител к антигену вируса

Критерии для диагноза первичной инфекции:

  • значительное повышение титра IgG (или общих антител) между острым периодом и выздоровлением;
     
  • наличие IgM обеспечивает возможность быстрой диагностики. Вместе с тем, существует проблемы, связанные с IgM такие, как взаимодействие с антителами ревматоидных заболеваний, обнаружение этих антител спустя годы после первичной инфекции;
     
  • сероконверсия - определяется как появление антител при ранее отрицательных, например, после инфицирования ВИЧ (от иглы-stick) или после контакта с больным краснухой.

Критерии для диагноза реинфекции

Острое повышение титра антител IgG тогда, как IgМ обычно низкий или отсутствует при реинфекции.

Методы в серологии:

  1. Classical Techniques:

    • complement fixation tests (CFT);
    • haemagglutination inhibition tests;
    • immunofluorescence techniques (IF);
    • neutralization tests;
    • single Radial Haemolysis.
       
  2. Newer Techniques:

    • radioimmunoassay (RIA);
    • enzyme linked immunosorbent assay (EIA);
    • particle agglutination;
    • western Blot (WB);
    • recombinant immunoblot assay (RIBA), line immunoassay (Liatek) etc.
 

Перейти в раздел «Отделения»